RNA提取試劑盒是如何進(jìn)行提取的呢？

　　RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA，用LB10裂解樣品后，加入氯仿，溶液分為無色水相和粉紅色有機(jī)相，RNA在水相中；用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA），流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比，該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專一性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣。

　　RNA提取試劑盒的提取步驟：

　　1、將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物*分離。

　　2、可選步驟：在4°C12,000rpm離心10分鐘，取上清轉(zhuǎn)入一個(gè)新的RNasefree的離心管中。（當(dāng)樣品富含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖或是細(xì)胞外物質(zhì)例如肌肉、脂肪組織或植物的塊莖部分時(shí)可能需要額外的分離步驟。）

　　3、每1ml裂解液RL加200μl氯仿。蓋緊樣品管蓋，劇烈振蕩15秒并將其在室溫下靜置3分鐘。

　　4、4°C12,000rpm離心10分鐘，樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上清水相層，RNA存在于上清水相層中。

　　5、將上清水相轉(zhuǎn)入新的離心管中，加入0.5倍上清水相體積的無水乙醇，立即吹打混勻。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會(huì)黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）

　　6、將混合溶液（每次小于700μl，）轉(zhuǎn)入套有吸附柱AC的離心管中，12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。

　　7、加500μl去蛋白液RE，12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。

　　8、加500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。

　　9、重復(fù)步驟8一次。

　　10、將吸附柱RA放回收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

　　11、取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加50~80μlRNase-freeH2O，室溫靜置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C。