ATCC細(xì)胞庫介紹及其使用方法

ATCC細(xì)胞庫介紹：

ATCC(美國模式菌種收集中心)，又稱為美國菌種保藏中心， 是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營的，非贏利性組織，可提供各種動植物細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)品、菌株達兩萬多種。ATCC的創(chuàng)立源于1925年某科學(xué)委員會意識到，科學(xué)研究對于微生物的需求增大，從而萌發(fā)了一個想法：創(chuàng)建一個微生物相關(guān)制品供應(yīng)中心。至今，ATCC向世界各地的政府、企業(yè)、科研機構(gòu)提供生物制品、技術(shù)支持和培訓(xùn)，成為了一個以非盈利為目的的全球性質(zhì)的生物資源中心。ATCC擁有目前世界上zui大的、品種zui豐富的微生物、細(xì)胞系以及重組DNA原料，同時它也是科研工作者gogn ren的提供shijieji的可靠的研究材料的供應(yīng)商。

ATCC細(xì)胞的使用方法：

1、細(xì)胞收到后的操作方法：

　　取25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或隔夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。然后，用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，收集瓶內(nèi)液體于50ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用6ml細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，全部接種到25cm²培養(yǎng)瓶中，再放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細(xì)胞量很多，可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。

2、細(xì)胞傳代：

細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時，收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按1:2的比例進行接種傳代，接種到25cm²培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天更換培養(yǎng)液。　　

3、細(xì)胞凍存：

a、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時，收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中。

b、先將細(xì)胞凍存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

a、從液氮中取出細(xì)胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

b、將凍存管中的細(xì)胞移至含有5ml細(xì)胞培養(yǎng)液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min。

c、棄上清，沉淀細(xì)胞用6ml細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，接種到培養(yǎng)瓶中，最后放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

d、第二天，換用新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。