【轉染小課堂】帶你了解轉染的奧妙和神奇！

轉染(Transfection):是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

原理：將DNA導入細胞使得它可利用細胞自身的細胞機制表達和合成蛋白質，將RNA導入細胞則是用來通過終止翻譯來降低某特定蛋白的合成。

轉染的RNA在細胞質中發揮作用，DNA則需被轉運到細胞核中從而達到有效的轉染。在核內，DNA會被短暫表達或整合到基因組DNA而將該遺傳改變傳代到下一代細胞。

轉染類型：

瞬時轉染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此，一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其他調控元件的分析，在轉染后24-96h內分析結果。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時內（依賴于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩定轉染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可以作為一種游離體整合到宿主細胞中。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩定轉染的同源細胞系。

轉染方式：

正向轉染：細胞培養板中先加入細胞然后再加入轉染復合物的方法。例如：DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、脂質體介導法、非脂質體的脂質活化的樹枝狀分子介導法、病毒介導法等。

反向轉染：核酸和轉染試劑復合物先加入到孔板中，然后再向小孔中加入細胞。例如：顯微注射、電穿孔、基因槍等。

化學方法:使用載體分子中和或使帶負電荷的核酸帶正電荷，包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、非脂質體脂質分子介導法、陽離子脂質體轉染、通過其他陽離子聚合物(如聚乙烯，PEI，活化的樹枝狀分子介導法)。

生物方法:依靠病毒包裝將非病毒基因轉移到細胞中的方法(也稱為轉導)，包括病毒介導法。

物理方法:將核酸直接遞送到細胞質或細胞核中，包括顯微注射、電穿孔、基因槍。

轉染影響因素：

核酸類型：質粒DNA，mRNA，siRNA，miRNA的mimic和inhibitors...

細胞密度：一般來說，當細胞密度達到60%~80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。

細胞類型：如原代細胞、貼壁細胞、懸浮細胞、神經細胞、腫瘤細胞、昆蟲細胞等。

細胞系的健康程度和存活力

轉染試劑類型:脂質體、非脂質體的脂質和活化的樹枝狀分子。

北京百奧創新科技有限公司提供多種形式和規格的轉染試劑，供您選擇：

一、PEI轉染試劑

二、脂質體轉染試劑

三、RNAi轉染試劑