細胞轉(zhuǎn)染的方法

　　轉(zhuǎn)染（Transfection），是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。

　　轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。那么你知道細胞轉(zhuǎn)染的方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

　　轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。

　　一、化學轉(zhuǎn)染法：

　　1.磷酸鈣法

　　原理：磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞

　　應(yīng)用：穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)

　　特點：不適用于原代細胞，操作簡便但重復(fù)性差，有些細胞不適用

　　2.陽離子脂質(zhì)法

　　原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞

　　應(yīng)用：穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)，所有細胞

　　特點：適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大

　　3.DEAE-右旋糖苷法

　　原理：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞

　　應(yīng)用：瞬轉(zhuǎn)

　　特點：相對簡便、結(jié)果可重復(fù)，但對細胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時需除血清

　　二、生物轉(zhuǎn)染法

　　1.病毒介導(dǎo)法

　　原理：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

　　應(yīng)用：穩(wěn)轉(zhuǎn)

　　特點：可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等

　　2.逆轉(zhuǎn)錄病毒

　　應(yīng)用：持定宿主

　　特點：但攜帶基因不能太大細胞需處分裂，需考慮安全因素

　　3.腺病毒

　　原理：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

　　應(yīng)用：瞬時轉(zhuǎn)染，待定宿主

　　特點：可用于難轉(zhuǎn)染的細胞，需考慮安全因素

　　三、物理轉(zhuǎn)染法

　　1.Biolistic顆粒傳遞法

　　原理：將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在細胞內(nèi)逐步釋放表達

　　應(yīng)用：瞬轉(zhuǎn)

　　特點：可用于:人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞

　　2.電穿孔法

　　原理：高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入

　　應(yīng)用：穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)，所有細胞

　　特點：適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大

　　3.顯微注射法

　　原理：用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核

　　應(yīng)用：穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)

　　特點：染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞

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