抗體抗原測(cè)定的Elisa方法

　　在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上，用于測(cè)定各種各樣的抗原、半抗原和抗體，Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡(jiǎn)便、靈敏、快速的測(cè)定方法。那讓我們一起來看看抗體抗原測(cè)定的Elisa方法吧！

　　抗體抗原測(cè)定的Elisa方法一：直接法

　　1、將抗原吸附在固相載體表面；

　　2、添加一種封閉試劑，防止檢測(cè)抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合；

　　3、添加直接偶聯(lián)某種酶（如HRP）的檢測(cè)抗體。該檢測(cè)抗體將結(jié)合抗原，并且剩余的抗體會(huì)從孔中洗掉；

　　4、添加這種酶的底物；

　　5、短暫孵育后，在酶標(biāo)儀上測(cè)定每個(gè)孔的信號(hào)。

　　抗體抗原測(cè)定的Elisa方法二：間接法（測(cè)定抗體效價(jià)）

　　1、首先將過量的抗原加入聚苯乙烯微量反應(yīng)板的四孔中進(jìn)行吸附，洗滌除去未吸附抗原；

　　2、將待測(cè)抗體（一抗）溶液加入反應(yīng)凹孔，溫育，形成抗原-抗體復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白；

　　3、加酶標(biāo)記抗抗體（二抗），溫育后洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物；

　　4、加入底物生成有色產(chǎn)物，加終止液終止酶促反應(yīng)，日測(cè)或用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值，計(jì)算第一抗體量。酶標(biāo)第二抗體是將第一抗體免疫另一種動(dòng)物，將抗體純化再與酶交聯(lián)而成的。

　　抗體抗原測(cè)定的Elisa方法三：夾心法（測(cè)定抗原量）

　　1、將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的特異性抗體的免疫球蛋白加入聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔中進(jìn)行吸附，洗滌除去未吸附抗體；

　　2、將待測(cè)抗原溶液加入反應(yīng)凹孔，溫育形成抗原-抗體復(fù)合物、洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白；

　　3、再加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的的特異性抗體，經(jīng)溫育形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物，洗滌；

　　4、加入抗第二種動(dòng)物抗體的酶標(biāo)記抗體，溫育后洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物；5、加底物生成有色產(chǎn)物，終止酶促反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值，經(jīng)計(jì)算得到抗原量。

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