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EZB彩色qPCR試劑盒說(shuō)明書(shū)與技術(shù)指南

更新時(shí)間：2025-03-21

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　　 EZB彩色qPCR試劑盒(貨號(hào)A0012-R2)說(shuō)明書(shū)與技術(shù)指南

EZB彩色qPCR試劑盒是專為多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR設(shè)計(jì)的全預(yù)混體系，包含優(yōu)化濃度的ROX2被動(dòng)參比染料，適配ABI 7500、Bio-Rad CFX96等多品牌qPCR儀。核心優(yōu)勢(shì)包括：

·2×預(yù)混Master Mix：整合HotStart Taq酶、dNTPs及反應(yīng)緩沖液

·高兼容性：支持SYBR Green I、EvaGreen及TaqMan探針檢測(cè)

·擴(kuò)增效率：標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示≥98%擴(kuò)增效率(R²值>0.99)

貨號(hào)：A0012-R2

包裝規(guī)格：1 mL(50次反應(yīng)) / 5 mL(250次反應(yīng))

ROX濃度：預(yù)混0.3X ROX2(適配多數(shù)機(jī)型光學(xué)校準(zhǔn)需求)

適用樣本：DNA(≥1 ng/μL)、cDNA(稀釋比1:5-1:20)

保存條件：-20℃避光保存(避免反復(fù)凍融>5次)

有效期：生產(chǎn)日期起18個(gè)月

1. 反應(yīng)體系配置

2. 程序設(shè)置（兩步驟法）

①預(yù)變性：95℃ 3分鐘（激活HotStart酶）

②循環(huán)階段（40 Cycles）：

·95℃ 15秒（變性）

·60℃ 30秒（退火/延伸，FAM通道采集熒光）

③熔解曲線（選做）：
65℃→95℃，每0.5℃遞增，駐留5秒

3. 數(shù)據(jù)判讀

·Ct值閾：建議設(shè)置于熒光信號(hào)指數(shù)增長(zhǎng)1/3處

·熔解曲線：?jiǎn)畏逄崾咎禺愋詳U(kuò)增（Tm值波動(dòng)≤1.5℃為正常）

1. 基因組DNA定量（人類GAPDH基因）

·模板量：10 ng DNA

·引物濃度：0.2 μM

·結(jié)果判讀：Ct值＜28（3次重復(fù)CV≤1.5%）

2. 病毒RNA檢測(cè)（甲流H1N1）

·反轉(zhuǎn)錄整合：直接使用cDNA（試劑盒兼容預(yù)混RT-qPCR體系）

·探針濃度：TaqMan探針0.5 μM

·靈敏度：檢測(cè)下限達(dá)10 copies/μL

3. 細(xì)菌表達(dá)分析（大腸桿菌16S rRNA）

·抑制劑處理：添加1% BSA消除腐殖酸干擾

·梯度稀釋：標(biāo)準(zhǔn)曲線R²值需≥0.995