EZB彩色qPCR試劑盒說明書與技術指南

更新時間：2025-03-21

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　　 EZB彩色qPCR試劑盒(貨號A0012-R2)說明書與技術指南

EZB彩色qPCR試劑盒是專為多重實時熒光定量PCR設計的全預混體系，包含優化濃度的ROX2被動參比染料，適配ABI 7500、Bio-Rad CFX96等多品牌qPCR儀。核心優勢包括：

·2×預混Master Mix：整合HotStart Taq酶、dNTPs及反應緩沖液

·高兼容性：支持SYBR Green I、EvaGreen及TaqMan探針檢測

·擴增效率：標準曲線顯示≥98%擴增效率(R²值>0.99)

貨號：A0012-R2

包裝規格：1 mL(50次反應) / 5 mL(250次反應)

ROX濃度：預混0.3X ROX2(適配多數機型光學校準需求)

適用樣本：DNA(≥1 ng/μL)、cDNA(稀釋比1:5-1:20)

保存條件：-20℃避光保存(避免反復凍融>5次)

有效期：生產日期起18個月

1. 反應體系配置

2. 程序設置（兩步驟法）

①預變性：95℃ 3分鐘（激活HotStart酶）

②循環階段（40 Cycles）：

·95℃ 15秒（變性）

·60℃ 30秒（退火/延伸，FAM通道采集熒光）

③熔解曲線（選做）：
65℃→95℃，每0.5℃遞增，駐留5秒

3. 數據判讀

·Ct值閾：建議設置于熒光信號指數增長1/3處

·熔解曲線：單峰提示特異性擴增（Tm值波動≤1.5℃為正常）

1. 基因組DNA定量（人類GAPDH基因）

·模板量：10 ng DNA

·引物濃度：0.2 μM

·結果判讀：Ct值＜28（3次重復CV≤1.5%）

2. 病毒RNA檢測（甲流H1N1）

·反轉錄整合：直接使用cDNA（試劑盒兼容預混RT-qPCR體系）

·探針濃度：TaqMan探針0.5 μM

·靈敏度：檢測下限達10 copies/μL

3. 細菌表達分析（大腸桿菌16S rRNA）

·抑制劑處理：添加1% BSA消除腐殖酸干擾

·梯度稀釋：標準曲線R²值需≥0.995

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